index
中 文 ENGLISH
HomeAbout UsCharacteristic businessAgent BrandCareersContact UsSite MapOnline communications
    Products Search
 
    Product Catalog
Nucleic acids
 Nucleic acid purchase  
Nucleic acid amplification  
Nucleic acid analysis   
Nucleic acid isolation and purification
Proteins
 Protein purchase   
Protein isolation & purification
 Protein expression  
Protein analysis
  Others
Cell
 Cell purchase    Cell isolation
 Cell cultivation and
microorganism fermentation
 Cell analysis
Consumables
    Electronic journals
 
 
 
Your position:  Home >> Technical literature >> Cell technology >> 
none
Lymphocyte hybridoma monoclonal antibody technique
2008-9-24
   Download

1975年,Kohler和Milstein发现将小鼠骨髓瘤细胞和绵羊红细胞免疫的小鼠脾细胞进行融合,形成的杂交细胞既可产生抗体,又可无限增殖,从而创立了单克隆抗体杂交瘤技术。这一技术上的突破不仅为医学与生物学基础研究开创了新纪元,也为临床疾病的诊、防、治提供了新的工具。
  制备单克隆抗体包括动物免疫、细胞融合、选择杂交瘤、检测抗体、杂交瘤细胞的克隆化、冻存以及单克隆抗体的大量生产,要经过几个月的一系列实验步骤,下面按照制备单克隆抗体的流程顺序,逐一介绍其实验方法。
  一、细胞融合前准备
  (一) 免疫方案
  选择合适的免疫方案对于细胞融合杂交的成功,获得高质量的McAb至关重要。一般要在融合前两个月左右确立免疫方案开始初次免疫,免疫方案应根据抗原的特性不同而定。
  1. 颗粒性抗原免疫性较强,不加佐剂就可获得很好的免疫效果。下面以细胞性抗原为例的免疫方案:
          初次免疫       1×107/0.5ml ip (腹腔内注射)
            ↓ 2~3周后
          第二次免疫      1×107/0.5ml ip
            ↓ 3周后
          加强免疫(融合前三天) 1×107/0.5ml ip或iv(静脉内注射)
            ↓
          取脾融合
  2. 可溶性抗原免疫原性弱,一般要加佐剂,常用佐剂:福氏完全佐剂,福氏不完全佐剂。要求抗原和佐剂等体积混合在一起,研磨成油包水的乳糜状,放一滴在水面上不易马上扩散呈小滴状表明已达到油包水的状态。商品化福氏完全佐剂在使用前须振摇,使沉淀的分枝杆菌充分混匀。
      初次免疫  Ag 1~50μg 加福氏完全佐剂皮下多点注射
              (一般0.8~1ml 0.2ml/点)
        ↓3周后
      第二次免疫 剂量同上,加福氏不完全佐剂皮下或ip
                (ip剂量不宜超过0.5ml)
        ↓3周后
       第三次免疫 剂量同上,不加佐剂,ip
          (5~7天后采血测其效价,检测免疫效果)
        ↓2~3周后
      加强免疫,剂量50~500μg为宜,ip或iv
        ↓3天后
       取脾融合
  目前,用于可溶性抗原(特别是一些弱抗原)的免疫方案也不断有所更新,如①将可溶性抗原颗粒化或固相化,一方面增强了抗原的免疫原性,另一方面可降低抗原的使用量。②改变抗原注入的途径,基础免疫可直接采用脾内注射。③使用细胞因子作为佐剂,提高机体的免疫应答水平,促进免疫细胞对抗原反应性。
  (二) 饲养细胞
  在制备单克隆抗体过程中,许多环节需要加饲养细胞,如:在杂交瘤细胞筛选、克隆化和扩大培养过程中,加入饲养细胞是十分必要的。常用的饲养细胞有:小鼠腹腔巨噬细胞(较为常用)、小鼠脾脏细胞或小鼠胸腺细胞,也有人用小鼠成纤维细胞系3T3经放射线照射后作为饲养细胞,使用比较方便,照射后可放入液氮罐长期保存,随用随复苏。


更多内容请下载文件...

 
Previous:>> Colletion and storage of specimens
Next:>> Flow cytometry
  网友评论: (只显示最新10条. 评论内容只代表网友观点, 与本站立场无关!)
  • 游客『lZCX3w0t』于2016-3-5 22:32:48发表评论:
  • 评分: 5分
    ˳ǰֽ̲t.qq.com/yunc-hiv˳ǰ̲ҽԺ
  • 游客『d2ZEDhxA』于2016-2-22 10:03:52发表评论:
  • 评分: 5分
    HIV(t.qq.com/jhazb-hiv)
  • 游客『5nblXUfG』于2016-2-18 9:21:56发表评论:
  • 评分: 5分
    ̫ԭֽ̲(t.qq.com/tyazb-hiv)
  • 游客『EnY80Q5u』于2016-2-16 9:16:05发表评论:
  • 评分: 5分
    ,t.qq.com/qhdazb-hiv,ػʵ̲.
  • 游客『ADqzyIVh』于2016-2-15 13:58:08发表评论:
  • 评分: 5分
    ԼⰬ̲t.qq.com/syazb-hivHIVֽ
    查看关于此文章的所有评论
    Address: Address: No.11, Dongfang East Road, Chaoyang District, Beijing, China China Post code: 100191
    Tel:00400-810-0881 0086-10-8441 5678    Fax:0086-10-84415679    京ICP备06004786号

    trade trade Rhinestone Jewelry business trade wholesale clothing lawyer Rhinestone Jewelry