免疫组织化学（IHC）、免疫细胞化学（ICC）和免疫荧光（IF），姑且称为定位检测抗原表达的「三驾马车」，是生物学研究中常用的免疫学实验。

三种方法原理相似，易于混淆。实验人员在挑选抗体产品时常常有这样的困惑，某一种应用的抗体是否也适用于另外两种实验？是，也不是。具体要视不同品牌而定，下面让我们为您一一解惑：

「三驾马车」的应用有何不同？

首先，我们一起了解下三种检测方法的区别。IHC 应用的样本类型是组织，ICC 的样本类型是细胞，而 IF 则是采用荧光标记抗体实现组织/细胞中目的蛋白的定位。其中，IHC 更可以根据组织切片的形式分为 IHC-P（石蜡切片）及 IHC-Fr（冰冻切片）。

Bio-Techne 的抗体产品选择的特别之处在于，不会显示单独的 IF 应用，而是与 ICC 合并为一类：ICC/IF。因而，涉及三种检测方法的应用标识主要分为：ICC/IF，IHC（IHC-P、IHC-Fr）。

左上，IHC：使用 HIF-1 alpha 抗体（Novus，NB100-105）在人肾脏中染色 HIF-1 alpha；右上，ICC：使用 10 µg/mL IRAK4 抗体（Novus，NBP1-77231）和 HRP 偶联的二抗在 K562 细胞中检测到 IRAK4 的表达。细胞用 DAB 染色（棕色），细胞核用苏木精（蓝色）复染。左下，基于组织的 IF：使用 1 μg/mL 的 GAP-43 抗体（Novus，NB300-143）及 AlexaFluor® 488 标记的二抗，检测 E15.5 小鼠胚胎的石蜡切片中 GAP-43 的表达。DAPI 用于细胞核复染；右下，基于细胞的 IF：使用 15 µg/mL 的 IRAK4 抗体（R&D Systems，AF3919）及 NorthernLights™ 557 偶联的二抗（红色）在 THP 1 细胞中检测 IRAK4。用 DAPI（蓝色）对细胞核进行染色。

如何挑选合适的 IHC/ICC/IF 抗体？

在了解三种检测方法的差别之后，我们回到文章开头的问题，一种抗体是否可以在三种检测方法中通用？换句话说，如何挑选适用于自身实验的抗体呢？

Bio-Techne 旗下两大抗体品牌 R&D Systems® 与 Novus Biologicals®，在抗体的适用范围（IHC/ICC/IF）描述方面存在差异：

1. R&D Systems® 品牌的抗体在产品页面显示已经验证的种属（Species）及应用 (Applications)，这些应用通常在说明书中会有详细的信息。

[特别注意] R&D Systems® 品牌抗体应用中 IHC 或者 ICC/IF 只要有一项，则可以适用于 IHC 及 ICC/IF 的应用。一般来说，应用中包含「IHC」的抗体同时适用于 IHC-Fr 及 IHC-P，除非说明书中另有声明。

例如，巨噬细胞标志物 CD68（货号 MAB20401）抗体，应用栏中仅标出了 ICC/IF，虽然不能确定一种抗体在每一种组织中都有同样的表现，但我们可以证明其对固定抗原的识别，所以也可应用于 IHC 实验。

温馨提示：若说明书中没有 IHC 以及 ICC/IF 的应用说明，表明我们没有任何数据来支持相应的应用，即不能保证实验结果。 

2. 同样的，Novus Biologicals® 抗体产品页面也显示出所有经过验证的种属（Species）及应用 (Applications)。值得一提的是，除 Novus Biologicals® 实验室验证的种属及应用外，部分数据也来自于客户的鼎力支持。

除此之外，还有些抗体包含 (-) 标志，代表验证过为阴性的种属或者应用，不建议您再次进行尝试。

[特别注意] Novus Biologicals® 的 IHC 与 ICC/IF 两种应用不能通用，这一点与 R&D Systems® 的规定有所不同。此外，若有单独标注 IHC 的子类（IHC-Fr、IHC-P 或 IHC-Whole Mount），只验证用于单独标注的子类，如果只有 IHC 标志而无子类标志，则适用于所有的 IHC 切片类型。即：

• 抗体 A 标注了 IHC，则可以应用于 IHC-P、IHC-Fr，未验证 ICC/IF；
• 抗体 B 标注了 IHC，IHC-Fr，则可以应用于 IHC-Fr，未验证 IHC-P 及 ICC/IF；
• 抗体 C 标注了 ICC/IF，则可以应用于 ICC/IF，未验证 IHC-P 及 IHC-Fr。

以自噬标志物 LC3B（NBP2-46892）为例，应用栏中标出了 ICC/IF，IHC，IHC-P，说明此产品已验证适用于 ICC/IF 和 IHC-P，未验证 IHC-Fr 实验。

根据品牌的不同，可以选择合适的官方验证过的抗体。谨记上述小贴士，开展实验不用愁。

以上文字和图片来源于Bio-techne