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新品首发 | ATCC助力心血管疾病研究——人永生化肺动脉内皮细胞

背景资料

根据世界卫生组织部公布的全球十大致死病因中,心血管疾病常年居于首位。因此,降低心血管疾病的产生及风险干预是当前医学研究的重要课题之一。

而在心血管中的内皮细胞具有充当血液和周围组织之间的屏障、调节血管功能、控制血管舒张和收缩、抑制白细胞和血小板粘附防止血液凝固、释放血管活性物质等重要血管生物学功能。

利用内皮细胞开发诊断工具,进行早期检测内皮稳态紊乱或干预措施,在心血管疾病的治疗方面是一个重要的发展方向。

原代细胞是是指从机体取出后立即培养的细胞。通常把离体培养第1代至10代以内的细胞称为原代细胞,正常组织来源的原代细胞通常可以在体外培养条件下生长和分裂,但经过有限次的细胞传代后,就会停止增殖并死亡,限制了细胞培养技术的进一步应用。

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利用细胞永生化技术,可以通过基因变化或者外界各种刺激因素,使细胞在体外培养的过程中,避免正常细胞的衰老死亡过程,从而实现长期传代培养、无限分裂增殖,进而提升原代细胞的利用次数和实用价值。

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B 淋巴瘤莫洛尼鼠白细胞病毒(Mo-MLV)插入位点1(BMI-1)是一个转录抑制因子,在1991年被首次报道,隶属于PcG蛋白家族,在细胞增殖和多种肿瘤干细胞自我更新、分化调节中发挥重要作用。

在多项研究中发现,BMI-1与人类多种肿瘤的发生、发展密切相关,例如乳腺癌、胃癌、宫颈癌、膀胱癌、大肠癌等

BMI-1通常在癌症中具有高表达的特性,而在正常组织细胞或良性病变组织中呈现低表达或不表达的特点,并且与患者预后不良呈一定的相关性,这一特性使得BMI-1成为癌症预后评测指标的数据参考,并且具有患者疾病早期诊断的临床医学意义。

ATCC特推出人永生化肺动脉内皮细胞。

新产品的诞生

人永生化肺动脉内皮细胞(HPAEC-BMI1)是利用 B 淋巴瘤莫洛尼鼠白细胞病毒(Mo-MLV)插入位点1(BMI-1)永生化的原代人类肺内皮细胞。

该细胞系可用于研究心血管疾病、肺动脉高压的发病机制,或发现和开发抗血管生成或促进血管生成的化合物。

产品信息

ATCC货号

CRL-4065

生物体

人体

组织/疾病 来源

肺动脉,正常

产品描述

HPAEC-BMI1是通过在原代肺动脉内皮细胞中稳定表达人BMI1基因而永生化的克隆细胞系。这些细胞保留了重要的内皮细胞特征和功能,如表达CD31/PECAM-1,摄取乙酰化低密度脂蛋白(AcLDL),并在基底膜基质上形成毛细血管样管。

产品应用

可用于心血管疾病研究、血管生成研究、药物筛选和毒理学测试。

实验数据

  • 细胞微观形态

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图1:HPAEC-BMI1的细胞形态。细胞在ATCC推荐的培养条件下培养。在显微镜下观察低(左)和高(右)密度的细胞形态,并用数码相机拍摄图像。倍增时间:约30小时

  • CD31表达

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图2:HPAEC-BMI1细胞中CD31表达的流式细胞术分析。收获细胞并用PE小鼠抗人CD31抗体(红色直方图)或PE小鼠IgG1,κ同种型对照抗体(蓝色直方图)染色。在Beckman Coulter CytoFlex细胞仪上进行流式细胞术。

 

  • 乙酰化低密度脂蛋白(AcLDL)的提取实验

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图3:HPAEC-BMI1细胞对AcLDL的摄取。细胞在四孔室载玻片上培养,并与Alexa Fluor 488  AcLDL一起孵育4小时。之后,用培养基洗涤细胞,然后在培养基中,在GFP荧光和透射光下使用EVOS荧光显微镜观察和拍照。不含Alexa Fluor 488 AcLDL的培养基中的细胞用作空白对照

  • 舒尼替尼对毛细血管样管形成的影响

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图4:舒尼替尼抑制HPAEC-BMI1细胞毛细血管样管的形成。血管形成测定在24孔板中进行。将在含有0、0.5、1.0、2.0和5.0 μM舒尼替尼(Sigma,#PZ0012)的培养基中的细胞接种到基底膜基质上(细胞基底膜;ATCC ACS-3035™)。在37°C下孵育24小时后,使用EVOS荧光显微镜在透射光下观察并拍摄毛细管状管。

  • 舒尼替尼对细胞迁移的影响

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图5:舒尼替尼抑制HPAEC-BMI1细胞的迁移。细胞在12孔板中生长至完全融合,然后用无菌的1200μL移液管尖端将细胞层划伤。将含有0、0.5、1.0、2.0和5.0 μM舒尼替尼的培养基加入孔中。在透射光下使用EVOS荧光显微镜在0、17和24小时观察和拍摄孔间隙。

结合永生化技术及BMI-1蛋白特点,这些永生化细胞是人类内皮微血管细胞不断再生的来源,可以作为原代人肺内皮细胞的替代物用于许多研究。

该细胞产品具体可用于研究心血管疾病、肺动脉高压的发病机制,或发现和开发抗血管生成或促进血管生成的化合物,可进一步助力您的科学研究顺利进行!

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参考文献:

[1] GP Dimri, et al. The Bmi-1 oncogene induces telomerase activity and immortalizes human mammary epithelial cells. Cancer Res 62(16): 4736-45, 2002. PubMed: 12183433

[2] CE Evans, et al. Endothelial cells in the pathogenesis of pulmonary arterial hypertension. Eur Respir J 58(3):2003957, 2021. PubMed: 33509961

[3] K Sobierajska, et al. Endothelial Cells in the Tumor Microenvironment. Adv Exp Med Biol 1234: 71-86, 2020. PubMed: 32040856

[4] C Viallard, et al. Tumor angiogenesis and vascular normalization: alternative therapeutic targets. Angiogenesis 20(4): 409-426, 2017. PubMed: 28660302

[5] A Eckers, et al. Endothelial cells in health and disease. Antioxid Redox Signal 22(14): 1209-11, 2015. PubMed: 25758789

 

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