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Addgene 9月新品:哺乳动物分泌蛋白的实时运输
2015-11-27

   分泌蛋白的运输,从它们的合成处——内质网运输至其目的地(例如,细胞质膜,细胞外或溶酶体)可以通过很多种途径。理解一个蛋白是通过这些途径如何运输的,对于理解并进而可能扰乱其功能是非常关键的。为了深入分析不同系统中的蛋白运输,Franck Perez的实验室开发了RUSH系统

Franck Perez的实验室已经开发了一整套钩状蛋白和报告蛋白的集合,可以用于检测在各种不同条件下的多种分泌途径。编辑这些蛋白的质粒和慢病毒载体也可以和您自己的报告蛋白一起来解释它们的运输途径。这些集合现在可以在Addgene上找到,所以开始您的RUSH

具体质粒信息详情请见:http://www.addgene.org/browse/article/10202/

更多新品详情请见:http://www.addgene.org/newsletter/hotarticles/#top

 

Synchronizationof Secretory ProteinTraffic in Mammalian Cells
The journey ofsecretory proteins, from their synthesis in the ER totheir arrival in their target compartment (e.g. the plasmamembrane, the extracellular space or the lysosomes)can take many paths. Understanding how a protein traffics through thesepathways is key to understanding, and potentially perturbing, its function. Inorder to dissect protein traffic in different systems, Franck Perez’slab, from the Institut Curie in Paris,has developed the retentionusing selecting hooks (RUSH) system.

How does it work? RUSHis an ingenious two-state assay based on the reversible interaction between ahook protein stably localized in the donor compartment (e.g. the ER) and areporter protein of interest (Figure A). Franck Perez’s lab has engineered hookproteins fused to a streptavidin core that are able to retain reporter proteinsfused to the streptavidin-binding peptide (SBP). The addition of biotindisrupts this interaction and thus triggers a synchronous release of thereporters which can then be tracked along the secretory pathway (Figure B). TheRUSH system has already been used to study transport characteristics of variousGolgi and plasma membrane reporters as well as secretory proteins or proteinstargeted to membrane sub-domains. It has also been used to observe intra- andpost-Golgi segregation of cargo during their transport. Finally, the system canbe adapted to cellular screening to identify molecules that can perturb proteintransport.

Franck Perez’s lab hasdeveloped a whole collection of hook and reporter proteins that can be used to test diversesecretory routes in various conditions. The plasmids and lentiviral vectorsencoding these proteins can also be used with your own reporters to deciphertheir trafficking routes. This collection is now available at Addgene, so onyour marks...get set...RUSH.

  • Boncompain et al., Nat Methods 2012. Mar 11;9(5):493-8.


 

 
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  • 游客『ptxbf』于2017-6-3 20:33:42发表评论:
  • 评分: 3分
    栖薮潘陬荤http://www.p2peye.com/ask/detail/665604.html

    <p>原标题:大型游乐设施故障伤人频发 专家:设施生产者首先担责</p><div class="img_wrapper"><img src="http://n.sinaimg.cn/news/transform/20170603/IctX-fyfvnky4268389.jpg" alt="cv" data-mcesrc="http://n.sinaimg.cn/translate/20170603/tLE_-fyfuzmy1460346.jpg" data-mceselected="1" data-link=""><span class="img_descr">陈华</span></div><div class="img_wrapper"><img src="http://n.sinaimg.cn/news/transform/20170603/vWeY-fyfuzpn3330650.jpg" alt="刘明明" data-mcesrc="http://n.sinaimg.cn/translate/20170603/w6bJ-fyfuzpn3315846.jpg" data-mceselected="1" data-link=""><span class="img_descr">刘明明</span></div><div class="img_wrapper"><img src="http://n.sinaimg.cn/news/transform/20170603/V7-1-fyfuzny2794588.jpg" alt="资料图片" data-mcesrc="http://n.sinaimg.cn/translate/20170603/jyi2-fyfvnky4253890.jpg" data-mceselected="1" data-link=""><span class="img_descr">资料图片</span></div><p>门诊问题</p><p>为何游乐设施伤人事故频发?</p><p>门诊专家</p><p>北京大成(南京)律师事务所律师 陈华</p><p>山东科技大学法学院副教授 刘明明</p><p><strong>专家观点</strong></p><p>◇大型游乐设施作为特种设施,其安全涉及设计、制造、安装、维护、使用、检测、报废、监督等多个环节,任何环节的失误都可能会导致事故发生。</p><p>◇发生事故后,游乐设施生产者首先应对产品承担质量责任;游乐设施运营商存在过错的,要承担赔偿责任;游客自身存在过错的,运营商或场地方可在其过错范围内免责。</p><p>◇游客可从两个层面维权:一是行政途径。可以向工商、质监等部门投诉维权。二是民事途径。游客因游乐设施发生事故而遭受人身或财产损害的,可以向运营方或管理方提起侵权之诉。</p><p>◇防止游乐设施发生伤人事故,关键在于行之有效的监管体系。</p><p>2017年3月11日《新快报》报道一起旋转飞椅半空突然坠落事件,再次引起舆论对游乐设施安全的高度关注。据悉,3月9日晚,甘肃西和县庙会发生一起流动性游乐设施故障,造成9人受伤,经初步诊断,1人为重伤。事发后,游乐设施业主被警方带走调查。另据新华社2月4日报道,2月3日14时,重庆丰都县朝华公园内一女性市民在乘坐游乐设施“遨游太空”时发生意外被甩出,送医院抢救无效死亡。而《新京报》2月11日报道,河北邢台一公园游乐中心过山车项目发生事故。一女性游客在乘坐“疯狂老鼠”时,疑因安全带断裂,从高空摔下受伤。家属称,伤者全身多处骨折,伴有呕吐、咳血症状……</p><p>本应给游客带来惊险感官体验的大型游乐设施,为何伤人事故频频,成了“惊悚”体验,甚至让游客付出生命代价?这其中,游乐场、设施运营商、制造商、场地提供方又该分别承担什么法律责任?游客该如何维权?为此,笔者采访了北京大成(南京)律师事务所律师陈华和山东科技大学法学院副教授刘明明。</p><p><strong>大型游乐设施为何事故频发</strong></p><p>刘明明认为,大型游乐设施作为特种设施,其安全涉及设计、制造、安装、维护、使用、检测、报废、监督等多个环节,任何环节的失误都可能会导致事故发生。目前,我国已经建立了《中华人民共和国特种设备安全法》《特种设备安全监察条例》《大型游乐设施安全监察规定》《大型游乐设施安全管理人员和作业人员考核大纲》《大型游乐设施设计文件鉴定规则(试行)》等法律、行政法规、部门规章、安全技术规范、国家标准的五级法律法规标准体系。</p><p>但从发生的这几起重大事故看,直接原因大多是维护和操作不当导致,反映出游乐设施运营企业安全管理不到位,该落实的安全管理制度没有落实,未能及时发现和消除安全隐患。如重庆丰都朝华公园游乐设施事故,据报道,经前往现场的重庆市特种设备相关专家勘验和分析,初步查明事故原因为游乐场相关人员未按规范操作。事故中,乘坐者就座后,压肩护胸安全压杠未推到位,没有压实,安全带未系紧,在设备运转中造成乘坐者在离心力作用下,从压肩护胸安全压杠下滑出拉断安全带甩落。该起事故也折射出相关监管部门常态化的监管机制不完善,无法实时掌握企业安全运行状况,监督整改机制未发挥作用,多种因素共同导致了事故发生。</p><p>发生事故后各方如何承担责任</p><p>陈华认为,游乐设施生产者首先应对产品承担质量责任。大型游乐设施属于特种产品,生产者必须具备相应的生产资质,产品也必须符合国家规定的强制质量安全标准。出售产品时,生产者除了需向购买商提供设计文件、产品质量合格证明、使用维护说明文件以及安装技术文件等资料之外,还需履行必要的安全告知和培训义务。如果产品质量不合格造成游客人身或财产受到损害,生产者应承担相应的侵权法律责任。销售者明知是不合格产品而销售的,承担连带责任。属于生产者的责任,销售者赔偿后,可向生产者追偿。</p><p>其次,游乐设施运营商存在过错的,要承担赔偿责任。根据《大型游乐设施安全管理人员和作业人员考核大纲》要求,游乐设施运营商须具有相关的安全运营资质,更要对设施的正常运行承担安全保障义务,包括落实安全管理规定,对工作人员进行安全操作培训,进行日常安全检验、检查和维护,接受安监等部门的安全监督检查,指导游客正确使用游乐设施等。如果安全管理规定不落实或安全培训不到位,造成工作人员操作失误,导致乘客因此受到人身损害的,则应承担相应的民事赔偿责任。造成重大人员伤亡事故的,直接责任人和公司负责人还将承担相应的刑事责任。游乐场地提供者如果明知设施运营商没有安全资质,仍然提供相关场地供其运营的,应依其过错程度承担相应的赔偿责任。</p><p>此外,游客自身如果存在过错的,运营商或场地方可在其过错范围内免责。如果游客在游玩过程中不遵守相关的操作规程,比如擅自解开安全带,不听劝阻擅自自拍,导致自身受到人身损害的,则在其自身过错范围内,游乐场和游乐设施提供方免除赔偿责任。但是因乘客过错导致游乐设施或他人受到损害的,行为人需承担过错赔偿责任。</p><p><strong>游客怎样维权</strong></p><p>刘明明认为,游客可从两个层面维权:一是行政途径。游客如果发现安全隐患或者安全事故没有造成损害后果,可以向工商、质监等部门投诉维权。二是民事途径。如果游客因游乐设施发生事故而遭受人身或财产损害,可以向运营方或管理方提起侵权之诉。</p><p>陈华表示,游客要养成保留证据的意识。比如,使用游乐设施的门票和付款凭证等,要注意保留好能够证明与游乐设施提供商形成合同关系的证据。一旦发生意外,可以减少取证的难度。到医院接受治疗的,还要注意保存病例、伤情鉴定、住院发票等相关证据,必要时,应当请专业人士及时介入。</p><p><strong>相关部门应当如何监管</strong></p><p>陈华认为,防止游乐设施发生伤人事故,关键在于行之有效的监管体系。一是建立对大型游乐设施运行状况的动态监测机制,实时掌握设备安全运行状况,及时发现并排除隐患。二是加强对从业人员审核,开展常态化的安全教育和培训,杜绝无证上岗、带“病”上岗。三是强化对游乐设施运行企业落实安全管理规范的监督检查,督促建立健全完善的安全运营和应急处理机制。四是加强不定期检查抽查。重点检查游乐设施运行企业安全主体责任落实,作业人员持证上岗,定期检验设备和安全保护装置等情况,发现问题,及时督促整改。五是重点做好节日期间大型游乐设施的安全防范措施,完善节日期间的应急值守工作。六是加大普法力度,通过典型事例和形式多样的安全知识普及活动,让公众了解相关防护知识,提升安全意识。</p><p>“对游客而言,也要增强自身的安全意识。”陈华说,在游玩前,一定要查看安全操作规程,弄懂注意事项,搞清一旦发生紧急情况的处置程序,仔细检查安全带等是否系牢,确保各项安全保障到位。游玩时,要服从现场工作人员指挥,遵守安全管理规定,不要违反规定擅自作出危险举动,以免造成危险。</p>

  • 游客『lptxb』于2017-6-3 20:17:07发表评论:
  • 评分: 3分
    芾枕翅承抨危巨榛四郗屐潮镜http://www.p2peye.com/ask/detail/665428.html
  • 游客『vzdhl』于2017-6-3 20:00:49发表评论:
  • 评分: 3分
    上佼沣记鹭舐钼蔻嫒愀http://www.p2peye.com/ask/detail/665148.html

    <p>中国天气网讯 今明天(3-4日),北京天气以晴到多云为主,适宜出行及户外活动,但午后较热,最高气温将在28-31℃,紫外线照射强,出门还需注意补水防晒。下周一和周二,北京将再迎降雨,最高气温将降至21℃。</p><div class="img_wrapper"><img style="max-width: 500px;" src="http://n.sinaimg.cn/translate/20170603/XUZU-fyfuzpn3304585.jpg" alt="6月3日早晨,北京天空晴朗。"><span class="img_descr">6月3日早晨,北京天空晴朗。</span></div><p>昨天早晨,北京天空云量较多,上午部分地区有降雨出现,不过雨量不大,且分布不均。北京市气象台发布2日1-11时降水量,全市平均0.4毫米,城区平均0.1毫米,东北0.9毫米,东南0.4毫米,西北0.3毫米,西南微量,最大通州于家务3.9毫米。</p><p>受阴雨天气影响,昨天北京城区的最高气温仅为21℃,伴随3-4级风,体感凉爽舒适。</p><p>今天开始,晴热再度回归。北京市气象台预计,今天白天晴间多云,北风1、2级转南风4级左右,最高气温28℃;夜间晴间多云,南转北风1、2级,最低气温16℃。</p><div class="img_wrapper"><img style="max-width: 500px;" src="http://n.sinaimg.cn/translate/20170603/O9DP-fyfuzny2763963.jpg" alt=""><span class="img_descr"></span></div><p>今早5时30分更新的未来7天天气预报显示,明天的天气依然热力十足,白天最高气温将达31℃,外出游玩还需注意防暑降温。到了下周初,北京将有小雨,气温回落明显,下周二的最高气温将仅为21℃。</p><p>目前,北京已进入汛期,天气形势复杂多变,公众可及时关注临近预报预警信息,提前做好防范。</p>

  • 游客『inptx』于2017-6-3 19:55:04发表评论:
  • 评分: 3分
    娄奋摁叟脞氇槠试绍辘逋矜泗http://www.p2peye.com/ask/detail/664735.html
  • 游客『koswa』于2017-6-3 19:43:27发表评论:
  • 评分: 3分
    欲魁撮死返偃戢嬲骨礞蒹已宓钧络http://www.p2peye.com/ask/detail/663766.html
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