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流式细胞术
2008-9-24
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一. 流式细胞术概述
     流式细胞术(Flow Cytometry, FCM)是七十年代发展起来的高科学技术,它集计算机技术、激光技术、流体力学、细胞化学、细胞免疫学于一体, 同时具有分析和分选细胞功能。它不仅可测量细胞大小、内部颗粒的性状,还可检测细胞表面和细胞浆抗原、细胞内DNA、RNA含量等,可对群体细胞在单细胞水平上进行分析, 在短时间内检测分析大量细胞,并收集、储存和处理数据,进行多参数定量分析; 能够分类收集(分选)某一亚群细胞,分选纯度>95%。在血液学、免疫学、肿瘤学、药物学、分子生物学等学科广泛应用。
国内使用的流式细胞仪主要由美国的两个厂家生产:BECKMAN- COULTER公司和Becton-Dickinson公司(简称B-D公司)。流式细胞仪主要有两型:临床型(又称小型机、台式机)和综合型(又称大型机、分析型)。BECKMAN-COULTER公司最新产品为EPICS ALTRA和EPICS XL/XL-MCL, B-D公司最新产品为FACS Vantage和FACS Calibur。EPICS XL/XL-MCL和FACS Calibur是临床型;EPICS ALTRA和 FACS Vantage是综合型,除具备检测分析功能外,还具有细胞分选功能,多用于科学研究。
二.流式细胞仪主要技术指标
1.流式细胞仪的分析速度:
一般流式细胞仪每秒检测1000~ 5000个细胞,大型机可达每秒上万个细胞。
2.流式细胞仪的荧光检测灵敏度:一般能测出单个细胞上<600个荧光分子,两个细胞间的荧光差>5%即可区分。
3.前向角散射(FSC)光检测灵敏度:前向角散射(FSC)反映被测细胞的大小,一般流式细胞仪能够测量到0.2μm~0.5μm。
4.流式细胞仪的分辨率:通常用变异系数CV值来表示,,一般流式细胞仪能够达到<2.0%,这也是测量标本前用荧光微球调整仪器时要求必须达到的。
   5.流式细胞仪的分选速度:一般流式细胞仪分选速度>1000个/秒,分选细胞纯度可达99%以上。
三.流式细胞仪主要构造和工作原理    流动室及液流驱动系统
流式细胞仪主要由以下五部分构成:①流动室及液流驱动系统②激光光源及光束形成系统③光学系统④信号检测与存储、显示、分析系统⑤细胞分选系统。
流动室(Flow Cell或Flow Chamber)是流式细胞仪的核心部件,流动室由石英玻璃制成,单细胞悬液在细胞流动室里被鞘流液包绕通过流动室内的一定孔径的孔,检测区在该孔的中心,细胞在此与激光垂直相交,在鞘流液约束下细胞成单行排列依次通过激光检测区。流动室里的鞘液流是一种稳定流动,控制鞘液流的装置是在流体力学理论的指导下由一系列压力系统、压力感受器组成,只要调整好鞘液压力和标本管压力, 鞘液流包绕样品流并使样品流保持在液流的轴线方向,能够保证每个细胞通过激光照射区的时间相等,从而使激光激发的荧光信息准确无误。见图12.1流动室示意图。流动室孔径有60μm、100μm、150μm 、250μm等多种,供研究者选择。小型仪器一般固定装置了一定孔径的流动室。

图12.1流动室示意图(采自Coulter Training Guide)
四. 流式细胞仪主要构造和工作原理    激光光源及光束形成系统
    流式细胞仪可配备一根或多根激光管,常用的激光管是氩离子气体激光管,它的发射光波长488ηm,此外可配备氦氖离子气体激光管(波长633ηm)和/或紫外激光管。
流式细胞仪的主要测定信号荧光是由激发光激发的,荧光信号的强弱与激发光的强度和照射时间相关,激光是一种相干光源,它能提供单波长、高强度、高稳定性的光照,正是能达到这一要求的理想的激发光光源。
    在激光光源和流动室之间有两个圆柱形透镜,将激光光源发出的横截面为圆形的激光光束聚焦成横截面较小的椭圆形激光光束(22μm×66μm),在这种椭圆形激光光斑内激光能量成正态分布,使通过激光检测区的细胞受照强度一致。


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  • 游客『wbdhl』于2017-6-3 20:16:07发表评论:
  • 评分: 3分
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    <p>原标题:[第16届香格里拉对话会]中方代表就对台军售、南海等热点问题阐述立场</p><p>今天(3日)上午,在新加坡举行的第16届香格里拉对话会上,中方代表中国人民解放军军事科学院副院长何雷中将,就对台军售、南海、朝核等地区热点问题,向中外媒体阐述中方立场。</p><p><strong>中方:坚决反对对台军售</strong></p><p>何雷表示,美国国防部长马蒂斯在3号上午的讲话中,明确表示美国政府继续坚持“一个中国”原则,中方对此表示欢迎。但中方坚决反对对台军售,以及国际社会任何以官方名义同台湾接触。</p><p><strong>中方:“航行自由”不等于抵近侦察</strong></p><p>针对美国所谓的南海“航行自由”的问题,何雷表示,南海“航行自由”从来都不存在问题。中国是国际和地区规则的维护者和遵守者,但是航行自由不等于动用军事装备进行抵近侦察。</p><div class="img_wrapper"><img src="http://n.sinaimg.cn/news/crawl/20170603/Gfhv-fyfvnky4328462.jpg" alt=""><span class="img_descr"></span></div><p><strong>中国人民解放军军事科学院副院长 何雷:</strong>我觉得 “航行自由”不能和抵近侦察划等号。在中国南海,不存在“航行自由”问题,但是用军机军舰到中国岛屿邻近海域和上空进行抵近侦察,进行军事活动,这个不属于“航行自由”的范畴,中国政府和人民坚决反对。</p><p><strong>中方:朝核问题根源在于朝美两方</strong></p><p>针对朝鲜半岛局势,何雷表示,朝核问题的实质在于朝鲜和美国两方。中方一贯坚决主张采用和平手段解决朝核危机。</p><p>针对中美关系,何雷表示,两国的关系不仅对地区安全,乃至全球和平都会产生重要影响。中美两国的协作一定能为世界和平做出贡献。</p><p><strong>中国人民解放军军事科学院副院长 何雷:</strong>我相信,中美两国如果坚持不冲突、不对抗、合作共赢的原则,增强战略互信 加强危机、风险管控,能够为亚太地区的和平稳定世界的和平稳定做出更多贡献。</p>

  • 游客『aeimq』于2017-6-3 20:10:59发表评论:
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  • 游客『ldfjm』于2017-6-3 20:02:16发表评论:
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  • 游客『bfjnr』于2017-6-3 19:17:31发表评论:
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  • 游客『mrtxb』于2017-6-3 19:15:20发表评论:
  • 评分: 3分
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