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染色质免疫沉淀分析
2008-9-24
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真核生物细胞状态是由内源和外源因素共同影响的,所有信号传递途径的终点都是DNA。DNA通过核蛋白复合物组成染色质,染色质基因调控的一个重要作用位点。转录激活因子和辅助抑制因子的研究显示存在一种新的调节机制 “组蛋白密码”,其信息存在于组蛋白的转录后修饰等过程中。该类修饰包括组蛋白磷酸化、乙酰化、甲基化、ADP-核糖基化等过程。随着越来越多组蛋白核心结构区域和羧端修饰的确定,组蛋白密码在控制和调节基因功能过程中的作用越来越明确。
参与修饰的酶根据其作用的不同而分类:如组氨酸乙酰转移酶(HATs)可以将乙酰基团转到组蛋白上;组蛋白去乙酰酶(HDACs)可以去除氨基酸上的乙酰基团;组蛋白甲基转移酶(HMTs)可以将甲基基团转移到组蛋白上等。不同组氨酸修饰标记对应于不同的生物学过程,它可以作为调节因子的作用位点,也可以用来改变染色质结构。

凝胶电泳迁移率改变分析(EMSA)是目前研究转录调控蛋白和相应核苷酸序列结合的常用方法,但是由于许多转录调控蛋白有相似或相同的DNA结合位点,这种体外分析获取的结果不一定能真实地反映体内转录调控蛋白和DNA结合状况。
染色质免疫沉淀分析(ChiP)是基于体内分析发展起来的方法,它能真实、完整地反映结合在DNA序列上的调控蛋白。它是目前确定与特定蛋白结合的基因组区域或确定与特定基因组区域结合的蛋白质的最好方法。
ChiP技术和芯片技术的结合有利于确定全基因组范围内染色体蛋白的分布模式以及组蛋白修饰情况。

图:ChiP技术的示意图:
甲醛处理使蛋白质与DNA交联;
超声波将染色质打断成一定大小;
通过抗体沉淀蛋白质-DNA交联复合体;
解除交联,纯化DNA;
实时定量PCR检测DNA的量

应用:
组蛋白修饰酶的抗体作为“生物标记”
转录调控分析
药物开发研究
有丝分裂研究
DNA损失与凋亡分析

试剂盒组分
 ssDNA/Protein A Agarose
 ssDNA/Protein A agarose
 ssDNA/Protein G Agarose
 ChIP Dilution Buffer
 Low salt wash buffer
 High salt wash buffer
 LiCl Wash Buffer
 TE Buffer
 0.5M EDTA
 5M NaCL
 1M Tris-HCl, pH 6.5
 SDS Lysis Buffer


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  • 游客『zdfjm』于2017-6-3 20:35:27发表评论:
  • 评分: 3分
    澧失忑郦熬暑稃仔http://www.p2peye.com/ask/detail/665627.html

    <p>广西纪委6月2日晚间通报,广西铁路投资集团有限公司原董事、副总经理兼广西铁投冠信贸易有限公司原董事长郭成球严重违纪被开除党籍、取消退休待遇,这是今年以来,该国有企业的第三名原高管“落马”。</p><div class="img_wrapper"><img style="max-width: 500px;" src="http://n.sinaimg.cn/translate/20170603/08tv-fyfuzny2819482.jpg" alt=""><span class="img_descr"></span></div><p><strong>广西铁路投资集团三名原高管接连被查</strong></p><p>纪委的通报显示,经查,郭成球身为党员领导干部,违反生活纪律,与他人发生不正当性关系;利用职务上的便利,为他人谋取利益并收受巨额财物,涉嫌受贿犯罪。郭成球的违纪行为性质恶劣,且在党的十八大之后,仍不收敛、不收手,情节严重。根据《中国共产党纪律处分条例》等有关规定,经中共广西壮族自治区纪律检查委员会审议并报中共广西壮族自治区委员会批准,决定给予郭成球开除党籍处分,取消其退休待遇;将其涉嫌犯罪问题及线索移送司法机关依法处理。取消郭成球退休待遇由广西壮族自治区监察厅按程序报广西壮族自治区人民政府批准。</p><p>公开资料显示,郭成球是广西平南人,瑶族,1954年5月出生,1984年12月加入中国共产党,1979年12月参加工作。广西玉林地委党校党政管理干部专修科毕业,大专学历。</p><p>曾历任广西平南县马练乡副乡长、乡党委副书记,玉林地区外经贸委主任,广西陆川县委书记,博白县委书记,玉林市玉州区党委书记,广西铁路投资集团有限公司党委委员、副总经理等职。</p><p>今年4月10日,广西纪委通报郭成球涉嫌严重违纪接受组织审查。</p><div class="img_wrapper"><img style="max-width: 500px;" src="http://n.sinaimg.cn/translate/20170603/VDXD-fyfuzny2819486.jpg" alt=" 广西铁路投资集团有限公司原党委书记、董事长何国林"><span class="img_descr"> 广西铁路投资集团有限公司原党委书记、董事长何国林</span></div><p>距离广西纪委通郭成球被开除党籍、取消退休待遇的半个月前,广西纪委还通报了两名广西铁路投资集团的原高管涉嫌受贿犯罪,其中包括广西铁路投资集团有限公司原党委书记、董事长何国林。</p><p>广西纪委5月15日发出的通报显示,经查,何国林身为党员领导干部,违反生活纪律,长期与他人保持不正当性关系,造成不良影响;利用职务上的便利,为他人谋取利益并收受巨额财物,涉嫌受贿犯罪。何国林的违纪行为性质恶劣、情节严重,且在党的十八大之后,仍不收手、不收敛。根据《中国共产党纪律处分条例》等有关规定,经中共广西壮族自治区纪律检查委员会审议并报中共广西壮族自治区委员会批准,决定给予何国林开除党籍处分,取消其退休待遇;将其涉嫌犯罪问题、线索及所涉款物移送司法机关依法处理。取消何国林退休待遇由广西壮族自治区监察厅按程序报广西壮族自治区人民政府批准。</p><p>何国林曾任南宁地区糖业生产公司副经理,南宁地区糖业办公室副主任、主任,糖业局副局长、党组成员、局长、党组书记,经济贸易局局长、党委书记,南宁地区行署副专员,崇左市副市长,广西区政府副秘书长、办公厅副主任、党组成员,广西北部湾国际港务集团有限公司董事、党委副书记、总经理等职。</p><p>2008年10月起,何国林开始担任广西铁路投资集团有限公司董事长、党委书记一职。今年1月,广西自治区人民政府发布的人事任免消息:免去何国林同志的广西铁路投资集团有限公司董事长职务,退休。到了今年2月份,纪委通报何国林涉嫌严重违纪被查。显示其刚刚退休就“出事”。</p><div class="img_wrapper"><img style="max-width: 500px;" src="http://n.sinaimg.cn/translate/20170603/lmY--fyfuzpn3351623.jpg" alt=""><span class="img_descr"></span></div><p>与何国林同一天被纪委通报的另一名原高管是广西铁路投资集团有限公司原副总经理邵广毅。</p><p>纪委通报称,经查,邵广毅身为党员领导干部,违反政治纪律,对抗组织审查;违反组织纪律,未经批准私自出国,违规获取外国永久居留资格;违反廉洁纪律,收受礼金;利用职务上的便利,为他人谋取利益并收受巨额财物,涉嫌受贿犯罪。邵广毅的违纪行为性质恶劣、情节严重,且在党的十八大之后,仍不收手、不收敛。根据《中国共产党纪律处分条例》等有关规定,经中共广西壮族自治区纪律检查委员会审议并报中共广西壮族自治区委员会批准,决定给予邵广毅开除党籍、开除公职处分;将其涉嫌犯罪问题、线索及所涉款物移送司法机关依法处理。给予邵广毅开除公职处分由广西壮族自治区监察厅按程序报广西壮族自治区人民政府批准。</p><p>邵广毅曾任广西铁路投资(集团)有限公司综合事务部副部长、部长、办公室主任、总经理助理,兼任广西铁路投资集团有限公司董事会秘书,广西铁投冠信贸易有限公司董事长、总经理、法人代表,田德铁路有限责任公司副董事长等职务。2017年2月,因涉嫌严重违纪,接受组织审查。</p><p>今年端午节前夕,广西纪委通报5起违反中央八项规定精神典型问题时,其中包括邵广毅违规收受礼金等问题。通报显示,2010年至2016年期间,邵广毅先后收受某公司法定代表人送给的礼金共计9万元。另外,邵广毅还存在其他严重违反国家法律法规的问题。邵广毅受到开除党籍处分,给予其开除公职处分按程序报批;其违纪所得予以收缴并上交国库,涉嫌犯罪问题移送司法机关依法处理。</p><div class="img_wrapper"><img style="max-width: 500px;" src="http://n.sinaimg.cn/translate/20170603/tv47-fyfvnky4288597.jpg" alt=""><span class="img_descr"></span></div><p><strong>广西铁路投资集团是家什么样的企业</strong></p><p>据广西铁路投资集团官方网站显示,广西铁路投资集团有限公司于2008年11月25日正式揭牌,是自治区直属大型国有独资公司,主要职责为广西铁路建设项目筹集地方配套资金和作为广西方的出资人代表负责国有资产的经营管理和实现保值增值。</p><p>集团经营范围包括:铁路建设及相关投资与资产管理;大宗贸易及物流服务;土地与房地产开发与经营;广西铁路发展投资基金投资与管理。大锰公司经营范围:锰矿采选、冶炼加工、电池制造、机械制造、投资运营、进出口贸易。</p><p>集团公司本部内设机构15个,拥有二级全资及控股子公司7家、参股子公司1家、参股及控股合资铁路公司7家,三级全资、控股子公司共38家。截至 2016年底,集团注册资本142亿元,公司总资产约1069亿元。</p><div class="img_wrapper"><img style="max-width: 500px;" src="http://n.sinaimg.cn/translate/20170603/JU91-fyfvnky4288599.jpg" alt=""><span class="img_descr"></span></div><p><strong>广西铁路投资集团被巡视和“回头看”</strong></p><p>2015年10月,自治区党委对16家国有企业展开巡视,其中就包括广西铁路投资集团有限公司。之后自治区党委第七巡视组对广西铁路投资集团有限公司巡视反馈的问题是:落实“两个责任”不力,对违纪违法问题的查处态度不够鲜明,对下属企业综合经营可能引发的廉政风险行为缺乏有效监管。综合经营管理环节存在诸多乱象。</p><p>2016年1月,广西铁路投资集团有限公司公布巡视整改情况:广西铁投集团实行廉政谈话与约谈制度,开展干部任职廉政谈话36次,与下级党政主要负责人谈话11次,诫勉谈话5次。针对综合经营诸多乱象等问题,对下属子公司投资项目开展集中整治和专项检查,并健全完善制度,规范综合经营业务中项目调查、抵押评估、履行合同和监督管理等环节的管理。自巡视组进驻以来,累计收回、盘活应收账款14.65亿元。成立两个案件调查组,对6个风险项目进行立案调查,对明显存在失职行为的9名责任人给予党纪政纪处分。</p><p>此后的大半年似乎风平浪静。</p><p>2016年9月18日至10月25日,自治区党委第四巡视组对广西铁路投资集团有限公司进行了巡视“回头看”。并于2016年12月13日向广西铁路投资集团有限公司反馈了巡视“回头看”情况。</p><p>在巡视“回头看”中,巡视组发现存在一些问题,主要是:巡视整改不到位,认识不足,措施不够力,效果不明显。管党治党不够有力,党委核心领导作用发挥不充分,执行民主集中制不严格,党建工作不扎实,基层党组织基础薄弱。贯彻落实中央、自治区重大部署不到位,执行有偏差,督促落实有差距。主体责任不到位,责任担当不够,纪委“三转”不到位,聚焦主业不够。纪律规矩意识淡薄,违规决策、违规经营造成巨额资金损失风险,越权审批、违规兼职。因人设岗,有的用人不规范,执行个人有关事项报告制度不严格。执行中央八项规定精神不严不实,违规发放津补贴,超标准报销差旅费等问题。</p><p>该反馈还提到:巡视期间,巡视组收到反映一些领导干部的问题线索,根据有关规定,已移交有关部门处理。</p><p>在当日的巡视组反馈“回头看”会议中,时任广西铁路投资集团有限公司党委书记何国林表示,巡视组反馈的情况和问题,切中要害、令人警醒,集团党委完全赞成、诚恳接受,照单全收,认领责任,将以正风肃纪的责任担当,坚强有力的工作措施,坚决完成巡视整改任务。</p><div class="img_wrapper"><img style="max-width: 500px;" src="http://n.sinaimg.cn/translate/20170603/WoAh-fyfvnky4288603.jpg" alt=""><span class="img_descr"></span></div><p><strong>三名原高管“落马”在“回头看”之后</strong></p><p>广西头条NEWS(ID:cns-gx)注意到,广西铁路投资集团这三名“落马”的原高管都是在自治区巡视组“回头看”之后被查,而且三人都是利用职务上的便利,为他人谋取利益并收受巨额财物,涉嫌受贿犯罪。</p><p>在纪委的通报中,其中两人还违反生活纪律,何国林长期与他人保持不正当性关系,郭成球与他人发生不正当性关系。</p><p>巡视“回头看”是从去年开始正式实施的,2016年1月召开的中央纪委十五届六次全会明确提出,深化专项巡视,紧盯重点人、重点事和重点问题,必要时杀个“回马枪”,开展“回头看”。</p><p>目前,中央和地方党委巡视已呈常态化,实现全覆盖,并发现问题,查出一批腐败分子。但也看到,一些问题积弊多年,根除不易,甚至出现屡巡不改的现象,而巡视“回头看”就是要持续高压反腐,巩固前期巡视的成果。</p><p>中国纪检监察报这样形容巡视组的“回头看”:巡视“回头看”,不是“回眸一笑”,而是“回马一枪”。这一枪,要点中要害、枪枪见血。</p><p>这是对有些单位在巡视整改的过程中试图敷衍了事的当头棒喝,也是给那些认为巡视只是“一阵风”的干部警醒和认识。</p><div class="img_wrapper"><img style="max-width: 500px;" src="http://n.sinaimg.cn/translate/20170603/dvkL-fyfuzmy1502127.jpg" alt=""><span class="img_descr"></span></div>

  • 游客『soswa』于2017-6-3 20:01:22发表评论:
  • 评分: 3分
    钺磺鲨窠http://www.p2peye.com/ask/detail/665154.html

    <p>原标题:[突发]化隆县公安局成功处置一起袭警事件</p><div class="img_wrapper"><img src="http://n.sinaimg.cn/news/transform/20170603/Hjt0-fyfuzmy1553135.jpg" alt="化隆县领导看望慰问因公负伤公安民警、协警和村警     " data-mcesrc="http://wx4.sinaimg.cn/mw690/ebf3656cly1fg7adfbc7ej20hs0dc3zb.jpg" data-mceselected="1" data-link=""><span class="img_descr">化隆县领导看望慰问因公负伤公安民警、协警和村警     </span></div><p>6月1日,青海省海东市化隆县公安局民警在一施工现场出警时遭报袭警,致使21名民警不同程度受伤,多辆车辆受损。经海东市、化隆县两级公安机关果断处置,现场带离不法人员49人,后经过大量调查取证,对34名涉嫌违法人员依法作出治安行政处罚。</p><p>事发当日,化隆县有关部门组织实施石大仓乡抗旱应急备用水源饮水工程开工,工程人员准备施工时,工地周边部分村民阻碍施工,致使工程无法开工。化隆县公安局接到报警指令后出警,出警民警到达现场后,遭到部分不法分子石块袭击,21名出警民警不同程度受伤,多辆车辆受损。后经组织警力果断处置,将事态平息,现场49名不法人员被带离。通过调查取证,34人被治安行政处罚。</p><p>石大仓乡抗旱应急备用水源饮水工程于2015年6月开始实施,是一项投资5000万元的惠民工程。该工程建成后可解决石大仓乡台力盖等8村800户4074人10543头牲畜饮水问题和支哈堂等3村844亩农田灌溉用水问题。由于该工程水源地在石大仓乡吉加村,不属于项目受益村,故施工单位多次进场受到当地部分村民阻碍,一度使该工程搁浅。对此,化隆县委、县政府高度重视,于2016年专门成立协调领导小组,进行多次协商未果。6月1日,经县委、县政府再次研究决定,工程重启实施。当日上午10时施工单位进场准备施工时,再次受到石大仓乡高跃、香塔、拉卡、吉加等4村部分村民阻工,最终导致暴力袭警事件发生。</p><p>来源:化隆网警</p>

  • 游客『swaei』于2017-6-3 19:50:00发表评论:
  • 评分: 3分
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  • 游客『swaei』于2017-6-3 19:48:16发表评论:
  • 评分: 3分
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  • 游客『lptxb』于2017-6-3 19:24:12发表评论:
  • 评分: 3分
    踩圃锼欹啃岽荬才术娅http://www.p2peye.com/ask/detail/662992.html
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